材料與方法

  1、試驗材料

  2012年6月至2013年5月，在中國林業科學研究院亞熱帶林業實驗中心年珠林場林下經濟植物栽培實驗基地挖取多花黃精，切取根莖芽，參考周新華等人對外植體的滅菌處理方法，將消毒後的根莖芽接種在MS培養基上進行初代培養。培養約45d後，選擇初代培養的生長健壯的無菌苗作為試驗材料。

  2、試驗方法

  2.1、外植體的采集時間對無菌苗增殖的影響試驗

  選取分別於11～12、1～2、3～4、5～6、7～8和9～10月等6個時段采集的外植體初代培養後生長健壯的的無菌苗作為試驗材料，就外植體采集的不同時間對其腋芽增殖培養的影響情況進行了試驗，每個處理重複3次。將不同時間采集的外植體初代培養後生長健壯的無菌苗接種在不定芽誘導培養基MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1中，培養45d後觀察並統計其萌芽情況和萌發芽數，並按如下公式計算平均萌發芽數：

  平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數。

  2.2、增殖時間及切分方式對無菌苗增殖的影響試驗

  以初代培養後生長健壯的無菌苗為試驗材料，將根莖芽分別切成1、2、3份的無菌塊莖，分別以切分處理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ來表示，並將其分別接種在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1的培養基中，共計3個處理，每個處理接種20瓶，重複3次，分別於接種後的第25、35、45、55、65天觀察無菌苗的增殖情況，統計其萌發芽數，亦按如下公式計算平均萌發芽數：

  平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數。

  2.3、繼代培養次數對無菌苗增殖和生根的影響試驗

  從初代培養後生長健壯的無菌苗上切取1個腋芽作為第1次繼代培養的試驗材料，其後每次繼代培養的試驗材料均為其上一次繼代培養的增殖腋芽，每次繼代培養均將供試腋芽接種在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1培養基上進行培養，共進行了7次繼代培養，每隔45d完成1次繼代培養，每個處理接種20瓶，重複3次，每次繼代培養結束末期觀察並統計其萌芽情況和萌發芽數，均按如下公式計算平均萌發芽數：

  平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數。

  以每一次繼代培養後的無菌苗作為試驗材料進行生根試驗，每個處理重複3次。將每一次繼代培養結束後的無菌苗均接種在1/2MS+NAA1.0mg·L-1的生根培養基中，培養45d後觀察其生根情況，並統計每個處理相應的生根數和生根率。

  生根率=生根瓶數/接種總瓶數;

  平均生根數=生根總條數/生根瓶數。

  2.4、添加劑對其無菌苗增殖和生根的影響試驗

  在增殖和生根培養基中分別添加濃度為0.05、0.10、0.20、0.40和0.50g·L-1的活性炭，共計5個處理，每個處理接種20瓶，重複3次，培養45d後觀察其免费看片网站91苗增殖和生根情況，並統並計算平均萌發芽數、生根數和生根率。

  平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數;

  生根率=生根瓶數/接種總瓶數;

  平均生根數=生根總條數/生根瓶數。

3、培養條件

  在以上各試驗的培養基中均添加瓊脂6.1g·L-1，蔗糖30g·L-1，將培養基的pH值均調節為5.8，並將培養基置於121℃下高壓滅菌17min;以上試驗均在培養溫度為(24±2)℃、光照強度控製在1500～2000lx的範圍內、每天光照時間12h、濕度控製在70%左右的環境中進行。

  4、數據處理

  采用SPSS18.0統計分析軟件進行方差分析和多重比較。多重比較采用顯著係數為0.05的Duncan多範圍檢驗方法，所有檢驗數據都在同一量綱上進行分析。